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抗原修復液胰酶法

更新時間:2024-09-26

簡要描述:

抗原修復液胰酶法
組織在制作過程中,由于化學試劑的作用封閉了抗原,又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲,致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來,為了解決上述的問題,利用化學試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復。

抗原修復液胰酶法

在免疫組化染色后的鏡下觀察中,有發(fā)現(xiàn)這樣的結果,陽性物反應不強,時隱時現(xiàn),表達不均勻,有時可出現(xiàn)假陰性,這是因為:
1.組織在用甲醛固定的過程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定簇。甲醛與組織蛋白質類的反應是多樣而復雜的,因為它能和多種不同的功能基團結合,在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個作用,因為它是一種聚合固定劑,因而能在相鄰的蛋白質鍵間形成橋鍵的作用。
2. 甲醛在保存進程中會形成羥甲基,也可封閉抗原決定簇。據(jù)French和Edsall的研究認為,遇到的甲醇反應,就是加到一個含反應性氫原子的化合物中,形成一個羥甲基化合物。
3.在組織固定過程中,甲醛與蛋白質發(fā)生交聯(lián),形成醛交聯(lián)蛋白,這種化合物封閉了抗原,使之無法表達出來。
為了解決上述存在的問題,更好地暴露出抗原,將其很好地顯示出來,*的方法就是必須進行抗原修復。
至今為止,抗原修復有許多種方法,在這些方法中,有的是根據(jù)抗體的要求來進行,有的是根據(jù)抗原的表達程度來進行,我們則對每種病例每項檢測,都要求必須進行抗原修復,以達到抗原全面表達的狀態(tài)。

抗原修復液胰酶法使用方:

切片脫蠟水化,將100-200μl抗原修復液加至玻片上覆蓋組織,37℃ 10-15分鐘后(室溫條件下時間適當延長),PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。隨后即可進行封閉等后續(xù)的免疫染色步驟。


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