更新時(shí)間:2024-09-26
剛果紅染色法特指纖維素的染色法,剛果紅能把纖維素染成紅色復(fù)合物,對纖維二糖和葡萄糖無作用,可用此來鑒別纖維素或纖維素分解菌的分解作用
原理:
剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅——纖維素的復(fù)合物便沒法形成,培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈,通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌
方法:
常用的剛果紅染色法有兩種
方法一,先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)
在長出菌落的培養(yǎng)基上,覆蓋質(zhì)量濃度為1 mg/mI。的CR溶液,10~15 min后,倒去CR溶液,加入物質(zhì)的量濃度為l mol/l的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此時(shí),產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會(huì)出現(xiàn)透明圈。
(加NaCl的原因:剛果紅是結(jié)合到培養(yǎng)基的多糖底物,但分解纖維素的細(xì)菌可以產(chǎn)纖維素酶,能分解這個(gè)多糖底物成為寡糖,這樣剛果紅就不能結(jié)合上去了,氯化鈉就可以使結(jié)合不牢的剛果紅洗去,這樣就留下大小不一的透明圈,大的透明圈分解纖維素的能力就強(qiáng))
方法二,在倒平板時(shí)就加入剛果紅
配制質(zhì)量濃度為10 mg/mI的CR溶液,滅菌后,按照每200 mI。培養(yǎng)基加入1 mI。的比例加入CR溶液,混勻后倒平板。等培養(yǎng)基上長出茵落后,產(chǎn)生纖維素酶的菌落周圍將會(huì)出現(xiàn)明顯的透明圈 [1]
兩種剛果紅染色法的比較 : 剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過20年的歷史,課本中給出了兩種方法。
方法一是傳統(tǒng)的方法,
優(yōu)點(diǎn):這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。
缺點(diǎn):操作繁瑣,加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜;
方法二
優(yōu)點(diǎn):操作簡便,不存在菌落混雜問題,
缺點(diǎn)1:由于在纖維素粉和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。
缺點(diǎn)2:有些微生物具有降解色素的能力,它們在長時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅而形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分
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