更新時(shí)間:2024-09-26
流式細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)細(xì)胞周期檢測(cè)的原理:PI法是經(jīng)典的周期檢測(cè)方法。PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合,其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài),從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含量。
流式細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)細(xì)胞周期檢測(cè)的原理:
PI法是經(jīng)典的周期檢測(cè)方法。PI為插入性核酸熒光染料,能選擇性的嵌入核酸DNA和RNA雙鏈螺旋的堿基之間與之結(jié)合,其結(jié)合的量與DNA的含量成正比例關(guān)系,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,就可以得到細(xì)胞周期各個(gè)階段的DNA分布狀態(tài),從而計(jì)算出各個(gè)期的百分含量。PI染色后,假設(shè)G0/G1期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1,那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為2,正在進(jìn)行DNA復(fù)制的S期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為1-2之間。
細(xì)胞周期內(nèi)有兩個(gè)階段為重要:G1到S和G2到M;這兩個(gè)階段正處在復(fù)雜活躍的分子水平變化的時(shí)期,容易受環(huán)境條件的影響,如果能夠人為地進(jìn)行調(diào)控,將對(duì)深入了解生物的生長(zhǎng)發(fā)育和控制腫瘤生長(zhǎng)等有重要意義。能夠方便有效地檢測(cè)細(xì)胞周期的變化,對(duì)于藥物研發(fā)和疾病研究等都具有重要的意義。單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。
流式細(xì)胞周期檢測(cè)服務(wù)測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、流式細(xì)胞儀法、基于細(xì)胞成像的熒光檢測(cè)法等。流式細(xì)胞儀PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期的原理:由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同,通常正常細(xì)胞的G1/G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。
PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此,通過(guò)流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí),可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對(duì)應(yīng)的各細(xì)胞周期可通過(guò)特殊軟件計(jì)算各時(shí)相的細(xì)胞百分率。
流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,FCM)是一項(xiàng)新型的、發(fā)展迅速的生物醫(yī)學(xué)分析技術(shù),它是集激光技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、流體力學(xué)以及細(xì)胞免疫熒光化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)為一體的新型高科技細(xì)胞分析技術(shù)。流式細(xì)胞儀是應(yīng)用Chemicalbook流式細(xì)胞術(shù)建立起來(lái)的儀器裝置。它使細(xì)胞或微粒在液流中流動(dòng),逐個(gè)通過(guò)一入射光束,并用高靈敏度檢測(cè)器記錄下散射光及各種熒光信號(hào),從而得以對(duì)粒子進(jìn)行多參數(shù)分析,包括諸如粒子形狀和大小、細(xì)胞周期、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、細(xì)菌表面抗原、細(xì)胞DNA內(nèi)含物等。
細(xì)胞凋亡或稱(chēng)程序性細(xì)胞死亡(Programmed Cell Death ,PCD)是細(xì)胞的生命現(xiàn)象之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)及自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞的清除等方面起著十分重要的作用。細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)的失控可導(dǎo)致臨床各種疾病的發(fā)生。如老年性癡呆與神經(jīng)細(xì)胞凋亡過(guò)度有關(guān),自身免疫性疾病和腫瘤與細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。細(xì)胞凋亡有別于細(xì)胞壞死,它有一系列的細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的改變,包括出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。在正常的活細(xì)胞,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine, PS)位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè),但在凋亡的細(xì)胞,PS 從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面,暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。Annexin-Ⅴ(膜聯(lián)蛋白-V)是一種分子量為35-36KD的Ca2+ 依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白,能與PS高親和力結(jié)合。因此將Annexin-Ⅴ進(jìn)行熒光素(如FITC、PE)或生物素(Biotin)標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin-Ⅴ作為探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重,10 h后解剖取胸腺,分離胸腺細(xì)胞。用PBS洗兩遍,調(diào)整待測(cè)細(xì)胞的濃度為2×106 /ml,備用。
2. 200 μl細(xì)胞懸液加入1 ml冷PBS,輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮,1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘,棄上清。
3. 重復(fù)步驟2兩次。
4. 將細(xì)胞重懸于200 μl 標(biāo)記緩沖液。
1.整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,切勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4 ℃下操作。
2. 反應(yīng)完畢后要盡快檢測(cè),因?yàn)榧?xì)胞凋亡是一個(gè)動(dòng)態(tài)的過(guò)程,反應(yīng)一小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開(kāi)始衰變。
3. Annexin V-FITC是光敏物質(zhì),在操作時(shí)要注意避光。
送樣運(yùn)輸要求:
需要活細(xì)胞(只接武漢本地樣本,外地樣本不接)。如果細(xì)胞帶熒光,一定要在交接單和培養(yǎng)板上備注,否則按照無(wú)熒光處理,如果因此導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可用及樣本浪費(fèi),我方概不負(fù)責(zé),也不接受退單。
毓秀生物科技(上海)有限公司是一家專(zhuān)注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司,公司建有專(zhuān)業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室,為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國(guó)內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過(guò)多年研發(fā)工作,秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值,為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想,為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富"的經(jīng)營(yíng)理念,堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo),以服務(wù)質(zhì)量為根本,為中國(guó)生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。
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