久久人人妻人人爽人人卡片av,未满十八18禁止午夜免费网站,无码国产精品视频一区二区,亚洲91se在线

新聞中心您現在的位置:首頁 > 新聞中心 > 定量Q-PCR-ELISA檢測技術的相關原理講解
定量Q-PCR-ELISA檢測技術的相關原理講解
更新時間:2019-03-14   點擊次數:1883次
   定量Q-PCR-ELISA檢測技術的相關原理講解
  定量Q-PCR-ELISA檢測技術是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時在線監(jiān)控反應過程,結合相應的軟件可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度??捎糜趍RNA、microRNA、lncRNA等基因表達量的檢測。
  類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
  1.模板DNA的變性:模板DNA經加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
  2.模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,在溫度降至55℃左右時,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
  3.引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈重復循環(huán)變性-退火-延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2-4分鐘,在一個由計算機控制的循環(huán)加熱器上經過三十個循環(huán),就可以把原來的樣品地擴增了2的30次方倍。擴增產物的量可用下列公式表示:C=C0(1+P)n。
  其中:C為擴增產物量,C0為起始DNA量,P為擴增效率,n為循環(huán)次數。
  在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環(huán)數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應適當調節(jié)循環(huán)次數,在平臺期前結束反應,減少非特異性產物。到達平臺期所需循環(huán)次數取決于樣品中模板的拷貝。
  每一循環(huán)經過變性、退火和延伸,DNA含量可增加一倍(理論上)。對于某些擴增片段很短的PCR反應,即使Taq酶活性不是*也能在很短的時間內復制完成,因此可以改為兩步法,即退火和延伸同時在60℃-65℃間進行,以減少一次升降溫過程,提高了反應速度。
毓秀生物科技(上海)有限公司

毓秀生物科技(上海)有限公司

工廠地址:上海市閔行區(qū)江月路999號12號樓302室

毓秀生物科技(上海)有限公司版權所有  備案號:滬ICP備19003469號-1  總訪問量:203805  站點地圖  技術支持:化工儀器網  管理登陸