熒光定量Q-PCR檢測的取樣及運(yùn)輸須知
熒光定量Q-PCR檢測是利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的關(guān)系對起始模板進(jìn)行定量分析。
它的擴(kuò)增曲線反應(yīng)了Q-PCR動態(tài)進(jìn)程的曲線。
熒光閾值：前15個循環(huán)信號作為熒光本底信號，熒光閾值的默認(rèn)設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍，如果手動設(shè)置則設(shè)置大于熒光背景值和陰性對照的熒光高值，進(jìn)入指數(shù)期的初階段。
CT值：PCR擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)。
Q-pcr的取樣及運(yùn)輸事項：
一、細(xì)胞收集及保存
1.貼壁細(xì)胞胰酶消化后900轉(zhuǎn)5min離心至管底（非貼壁細(xì)胞直接離心），棄上清，將細(xì)胞凍存與-80度長期保存，-20度，暫時保存。若用于Q-PCR盡量使用滅菌無RNA酶離心管，RNA樣本保存液中-80度長期保存。
2.組織樣本取樣后立即-80或者液氮保存。后續(xù)用于Q-PCR的取樣后立即存于液氮或者-80度環(huán)境中，或者放于有RNA樣本保存液的滅菌無RNA酶離心管中-80度保存。
二、樣本運(yùn)輸
短時2h左右冰袋或者液氮運(yùn)輸，干冰（干冰可以維持-70度）密封運(yùn)輸。
三、樣本編號
樣本標(biāo)號清晰，須提供樣本清單。
病理實驗取樣及實驗注意事項：
1.動物組織提取后（玉米粒大小即可）迅速保存于4%多聚甲醛中固定，管體標(biāo)號，組織塊盡量少帶血液，或可以用多聚甲醛將樣本稍作清洗，常溫保存，常溫運(yùn)輸。做電鏡的樣本由2.5%戊二醛固定于15ml離心管內(nèi)，樣本直徑小于2mm，常溫保存常溫運(yùn)輸。
2.細(xì)胞樣本制作成爬片后PBS浸潤保存與細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，密封常溫運(yùn)輸。做電鏡的細(xì)胞離心收集好后2.5%戊二醛固定，常溫運(yùn)輸。
